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細胞劃痕實驗-第三方檢測機構

發(fā)布時間： 2024-07-08　　點擊次數： 1053次

　　細胞劃痕實驗又叫創(chuàng)傷愈合實驗，當細胞生長至融合成單層狀態(tài)時，在細胞層上人為制造一個空白區(qū)域，稱為“劃痕/傷口”，通過一段時間的培養(yǎng)，邊緣的細胞會逐漸向無細胞區(qū)域遷移，使“傷口”愈合，通過測量細胞遷移距離及速度反映細胞的遷移能力及修復能力。

　　在化妝品修復功效評價中，細胞劃痕實驗可以模擬皮膚受損后的自然愈合過程，用于觀察化妝品等外源因素對細胞遷移、修復和相互作用的影響。

　　中科檢測可開展細胞劃痕實驗，評估化妝品成分或產品對促進皮膚修復和愈合效果，出具的化妝品修復功效評價報告具有CMA資質。

　　細胞劃痕實驗應用方向

　　遷移能力：實驗中細胞遷移填充劃痕區(qū)域的速度可以作為評估化妝品促進皮膚愈合的一個指標。在實驗中表現(xiàn)出強遷移能力的化妝品成分，可能在實際應用中有助于加快皮膚受損區(qū)域的修復。

　　增殖效果：細胞在劃痕區(qū)域的增殖情況反映了化妝品促進皮膚細胞再生的潛力。增殖效果好的化妝品可能在實際使用中有助于皮膚恢復活力和彈性。

　　安全性評估：通過細胞劃痕實驗可以初步評估化妝品成分的安全性。如果在細胞水平上沒有表現(xiàn)出毒性或負面影響，這為進一步的體內測試和人體試驗提供了基礎。

　　劑量效應關系：實驗中可以測試不同濃度的化妝品成分，以確定有效劑量和安全劑量范圍，這有助于指導產品配方的開發(fā)。

　　長期效果預測：雖然細胞劃痕實驗是短期的，但它可以為預測長期皮膚修復效果提供一定的依據。例如，能夠顯著促進細胞遷移和增殖的成分，可能在實際使用中有助于減少疤痕形成。

　　臨床試驗：細胞劃痕實驗的結果需要通過臨床試驗來驗證。臨床試驗可以在實際皮膚上評估化妝品的效果，包括愈合時間、皮膚質地改善和整體修復效果。

　　綜合評估：細胞劃痕實驗只是評估化妝品修復功效的多種方法之一。它的結果需要與分子水平的研究、動物模型實驗以及其他體外實驗結果相結合，以全面評價化妝品的功效。

　　細胞劃痕實驗原理

　　細胞劃痕實驗是通過在細胞單層上劃痕并通過延時顯微鏡定期捕獲圖像，從而研究細胞遷移運動、修復能力和細胞間相互作用的實驗室技術，基本原理是：在融合的單層細胞上人為制造一個空白區(qū)域，稱為“劃痕/傷口”，劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕/傷口”愈合，于細胞遷移過程中在開始和定期捕獲圖像，通過測量不同時間點的劃痕間距并計算差值，可對細胞的遷移能力做出判斷。

　　細胞劃痕實驗步驟

　　1、準備

　　所有能滅菌的器械都要滅菌，包括直尺(或者24孔板蓋)和marker筆在操作前紫外照射30min(超凈臺內)。

　　2、流程

　　1)鋪板：將細胞消化后加入培養(yǎng)基終止消化，將細胞吹打均勻，然后按比例鋪板。如果不均勻可以用手掌對著一橫邊和一縱邊輕輕拍打，切忌四個邊都拍打，這樣細胞很容易聚到中間。

　　2)掌握細胞狀態(tài)，過夜能長滿為佳。

　　3)第二天用黃槍頭比著直尺(或者槍頭，板蓋)，垂直在原來的培養(yǎng)基里劃痕，每孔1道(也可多劃幾道，參考細胞狀態(tài))，槍頭要垂直，不能傾斜。

　　4)用PBS清洗細胞1-2次，去除劃下的細胞，加入低血清培養(yǎng)基(或者培養(yǎng)基)；然后去顯微鏡下拍照，盡量高倍鏡低倍鏡都拍照，可以事先在板子底部用Marker筆畫上小圓圈標記來保證能拍到同一個點，作好記錄。

　　5)加藥，放入37度5%CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)時間依照實驗要求進行，通常以12h、24h、48h為準。按所需時間節(jié)點安排取樣拍照時間。

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